بررسی امکان همسانه سازی و بیان ژن فاکتور مهار کننده لوکمیایی (lif) انسانی در باکتری اشرشیا کولی

فاکتور بازدارنده لوکمیایی انسانی (hlif)، سایتوکاینی پلیوتروپیک میباشد که عضو خانواده ی اینترلوکین-6 (il-6) است. این سایتوکاین یکی از مهمترین اعضای خانواده ی سایتوکاین il-6 میباشد. سایتوکاین lif دارای اثرات چندگانه تنظیمی بر روی انواع مختلف بافتها و سلولها هم در in vivo و هم در in vitro است. این مولکول یک فاکتور لمفوئیدی است که دارای فعالیت های متعددی از جمله، تمایز نورونهای کولینرژیک، کنترل پرتوانی سلولهای بنیادی، متابولیسم استخوان و چربی و غیره بوده و برای لانه گزینی جنین حائز اهمیت است و در پیشبرد تولید مگاکاریوسیت ها در محیط آزمایشگاه دخالت دارد. rhlif دارای پتانسیل هایی است که به یک کاندید تراپوتیک برای برخی بیماری ها مانند ms تبدیل گشته است. این فاکتور دارای اثراتی بر سلولهای پیش ساز خونی، سطوح پروتئین c reactive و بازیابی سلول های خون ساز پس از شیمی درمانی بوده و از تکثیر ویروس hiv-1 جلوگیری می نماید. lif نوترکیب سبب افزایش میزان تحرک و ابقاء اسپرم در مردان asthenosperm نیز می گردد. در این تحقیق توالی cdna بهینه و سنتز گردید، سپس در وکتور بیانی pet-28a(+) تحت کنترل پروموتر t7 و محل برش آنزیم های محدودکننده ی bamhi و xbai کلون شد. وکتور نوترکیب به درون باکتری اشرشیا کولی، سویه ی bl21 ترانسفورم گشته و به صورت یک پروتئین متصل به his.tag بیان گردید. صحت کلون شدن ژن مورد نظر با روش هضم آنزیمی و تعیین توالی تأیید گردید. همچنین برای بررسی بیان، از روش sds-page از نمونه های القاء شده با iptg استفاده شد. نتایج sds-page بیان پروتئین نوترکیب 19/7 کیلو دالتون فاکتور بازدارنده لوکمیایی انسانی را در سیستم باکتریایی نشان داد.